Sab Plasmide Double Nickase (h): sc-405461-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Sab Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Sab Double Nickase Plasmid (h) e il Sab Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SH3BP5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Sab Antibody (A-3): sc-390512
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Sab Plasmide Double Nickase (h) | sc-405461-NIC | 20 µg | $410.00 |
SH3BP5 codifica Sab, una proteina “scaffold” della membrana esterna mitocondriale che lega chinasi attivate dallo stress e contribuisce a organizzare la segnalazione di JNK a livello dei mitocondri. Regolando la localizzazione delle chinasi e il crosstalk con le risposte allo stress dipendenti da MAPK, Sab influenza la funzione mitocondriale, l’equilibrio redox e la segnalazione legata all’apoptosi. Un’alterata attività della via Sab/JNK è stata associata a risposte cellulari al danno ed è studiata in contesti di stress metabolico, segnalazione infiammatoria e disfunzione mitocondriale rilevante per la neurodegenerazione. In quanto nodo che collega segnali di stress citosolici a esiti mitocondriali, SH3BP5 viene regolarmente studiato per il suo impatto sulla dinamica mitocondriale e sulle decisioni di destino cellulare.
Sab Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SH3BP5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SH3BP5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SH3BP5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SH3BP5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.