Plásmido CRISPR de Activación (h) S-100A16: sc-406149-ACT

S100A16 codifica S-100A16, una pequeña proteína de unión a calcio con motivo EF-hand de la familia S100 que conecta la dinámica intracelular de Ca²⁺ con la señalización celular y la organización del citoesqueleto. Al modular interacciones proteína–proteína de manera dependiente del calcio, S-100A16 se ha asociado con procesos que incluyen la motilidad celular, la diferenciación y programas transcripcionales sensibles al estrés. Se ha descrito una expresión desregulada de S100A16 en múltiples contextos patológicos, incluidos cánceres y fenotipos fibróticos o metabólicos, donde podría influir en la plasticidad epitelio–mesénquima y en la remodelación del microambiente. Estas características hacen de S-100A16 una diana útil para estudiar redes de señalización reguladas por calcio y transiciones fenotípicas en células humanas.

S-100A16 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de S100A16 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

S-100A16 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus S100A16 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional S100A16, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de S-100A16. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo S100A16 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de S-100A16 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía S-100A16 en células tumorales con expresión de S100A16 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.