Plasmide CRISPR d'Activation (h) S-100 α chain: sc-402065-ACT

S100A1 code la chaîne α de S-100, une protéine EF-hand de liaison au calcium qui agit comme médiateur de signalisation, reliant la dynamique intracellulaire du Ca2+ aux réseaux d’interactions protéine–protéine. Dans les cellules humaines, S100A1 participe à la régulation de l’organisation du cytosquelette, de la motilité cellulaire et de la signalisation en réponse au stress, influençant des processus tels que la myogenèse, la fonction mitochondriale et le couplage excitation–contraction via des voies dépendantes du calcium. Une expression altérée de S100A1 a été rapportée dans de multiples contextes pathologiques, notamment les dysfonctions cardiovasculaires, le remodelage neuromusculaire et les cancers, où elle peut affecter les programmes de prolifération, d’invasion et de différenciation. En tant que marqueur moléculaire des états de signalisation dépendants du calcium, S100A1 est fréquemment étudiée dans la cartographie des voies et les modèles mécanistiques de l’homéostasie tissulaire spécifique et du remodelage associé aux maladies.

S-100 α chain Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de S100A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

S-100 α chain Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus S100A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription S100A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de S-100 α chain. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus S100A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de S-100 α chain au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie S-100 α chain dans les cellules tumorales présentant une expression de S100A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.