RUNX3 Plasmide Double Nickase (h): sc-401377-NIC

RUNX3 (Runt-related transcription factor 3) è un fattore di trascrizione legante il DNA della famiglia RUNX che eterodimerizza con CBFB per regolare la specificazione di linea, la differenziazione e il controllo del ciclo cellulare. Nei tessuti umani integra segnali provenienti dalla via TGF-β/SMAD e interseca i programmi trascrizionali di Wnt/β-catenina e quelli legati al sistema immunitario, modulando l’omeostasi epiteliale e le risposte infiammatorie. Alterazioni dell’espressione o della funzione di RUNX3 sono state associate a una regolazione anomala di apoptosi e differenziazione, e sono state riportate in studi su neoplasie gastrointestinali, carcinoma della mammella e disturbi immunitari. In quanto regolatore dipendente dal contesto di reti trascrizionali, RUNX3 è ampiamente utilizzato per indagare i meccanismi di soppressione tumorale, il crosstalk epitelio–immunitario e la regolazione genica nello sviluppo.

RUNX3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RUNX3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RUNX3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RUNX3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RUNX3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.