Rubicon Plasmide Double Nickase (h): sc-404222-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rubicon Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Rubicon Double Nickase Plasmid (h) e il Rubicon Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RUBCN. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rubicon Plasmide Double Nickase (h) | sc-404222-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rubicon Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404222-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RUBCN codifica Rubicon, una proteina contenente un dominio RUN che agisce come un regolatore negativo chiave dell’autofagia modulando l’attività di VPS34/PI3KC3 e la maturazione dell’autofagosoma. Rubicon partecipa anche al traffico endolisosomiale e si interseca con la segnalazione dell’immunità innata attraverso la regolazione della fagocitosi associata a LC3 e di vie vescicolari correlate. Controllando il flusso autofagico e la rimozione dipendente dai lisosomi, Rubicon influenza l’omeostasi cellulare in condizioni di stress e modella le risposte infiammatorie. Un’attività deregolata di RUBCN/Rubicon è stata implicata in contesti in cui l’autofagia e la processazione dei fagosomi risultano alterate, inclusi neurodegenerazione, biologia delle infezioni, disfunzioni metaboliche e adattamento cellulare correlato al cancro, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici.
Rubicon Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RUBCN nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RUBCN. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RUBCN. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RUBCN interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.