Ron β Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400489-ACT

MST1R codifica o receptor tirosina-quinase RON, incluindo a cadeia de sinalização Ron β, que medeia a ativação do receptor dependente de ligante e as cascatas de fosforilação a jusante. O RON integra sinais que regulam a motilidade de células epiteliais, a polarização de macrófagos e o tónus inflamatório, com a sinalização a fluir por vias como PI3K–AKT, RAS–MAPK e STAT para coordenar programas de sobrevivência, migração e diferenciação. A atividade aberrante de MST1R/RON tem sido associada a uma remodelação tecidular desregulada, fenótipos invasivos e alteração da sinalização no microambiente imunitário em múltiplos contextos de doença, tornando-o um nó útil para estudar o comportamento de redes de recetores tirosina-quinase. Em sistemas modelo humanos, o Ron β apoia estudos mecanísticos da ativação do receptor, do crosstalk com a sinalização da família MET e de outputs transcricionais ligados à adesão e às respostas a citocinas.

Ron β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MST1R sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ron β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MST1R em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MST1R, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ron β. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MST1R nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ron β no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ron β em células tumorais com expressão de MST1R silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.