RNF185 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-416413

Panoramica

RNF185 codifica una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING localizzata sulla membrana esterna mitocondriale, che contribuisce al controllo qualità delle proteine catalizzando il trasferimento di ubiquitina su substrati selezionati. Attraverso il turnover e la segnalazione dipendenti dall’ubiquitina, RNF185 è stata collegata alla regolazione dell’omeostasi mitocondriale, a processi correlati alla mitofagia e al crosstalk tra funzione mitocondriale e segnalazione dell’immunità innata. Le interazioni riportate con vie dell’autofagia e dell’infiammazione ne supportano la rilevanza per lo studio delle risposte allo stress che collegano il danno degli organelli a programmi trascrizionali a valle. Alterazioni dell’attività di RNF185 sono state investigate in contesti in cui la disfunzione mitocondriale e una proteostasi deregolata sono implicate, inclusi la neuroinfiammazione e il rimodellamento metabolico associato al cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RNF185 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RNF185 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RNF185 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RNF185 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RNF185.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RNF185 per lo studio della segnalazione di RNF185, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RNF185 critici per la funzione di RNF185
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RNF185 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RNF185 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RNF185 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RNF185. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RNF185 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RNF185 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RNF185 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RNF185 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.