RNase T2a Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-437175

Panoramica

Rnaset2a codifica la ribonucleasi lisosomiale/secretoria RNase T2a, membro della famiglia conservata delle RNasi T2 coinvolta nel turnover dell’RNA e nel riciclo dei nucleotidi. RNase T2a contribuisce all’omeostasi cellulare promuovendo la degradazione dell’RNA extracellulare e dell’RNA endolisosomiale, collegando il catabolismo dell’RNA alla funzione dei lisosomi e a più ampie vie di segnalazione della risposta allo stress e dell’infiammazione. Nei modelli murini, l’alterazione dell’attività della famiglia RNase T2 viene utilizzata per studiare come la persistenza anomala dell’RNA influenzi il riconoscimento immunitario innato, la neuroinfiammazione e il rimodellamento tissutale. Questi processi sono rilevanti per indagini meccanicistiche di fenotipi simili alle malattie da accumulo lisosomiale e dell’infiammazione sterile associata a una gestione deregolata degli acidi nucleici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RNase T2a (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rnaset2a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rnaset2a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rnaset2a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RNase T2a.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rnaset2a per lo studio della segnalazione di RNase T2a, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rnaset2a critici per la funzione di RNase T2a
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rnaset2a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RNase T2a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal RNase T2a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rnaset2a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RNase T2a Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR RNase T2a (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rnaset2a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rnaset2a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.