Plasmide Double Nickase (h) RIP3: sc-401008-NIC

RIPK3 code la kinase 3 sérine/thréonine associée au récepteur (RIP3), un régulateur central de la nécrose programmée (nécroptose) en aval des récepteurs de mort et des capteurs de l’immunité innée. Lorsqu’elle est activée, RIP3 forme le nécrosome avec RIPK1 et favorise la phosphorylation de MLKL, reliant la signalisation inflammatoire à la perturbation membranaire et à la libération de motifs moléculaires associés aux dommages (DAMP). L’activité de RIP3 intègre des signaux issus des voies du TNF, des TLR et de l’interféron, et peut également influencer des processus métaboliques et mitochondriaux en situation de stress. Une dérégulation de la signalisation de RIPK3 a été associée à des lésions tissulaires inflammatoires et à des réponses de mort cellulaire altérées dans des contextes pertinents pour le cancer, ce qui en fait un point d’entrée utile pour disséquer les décisions de destinée cellulaire.

RIP3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RIPK3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RIPK3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RIPK3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RIPK3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.