RIP140 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401787-ACT

NRIP1 kodiert RIP140, einen transkriptionellen Koregulator, der die Genexpression moduliert, indem er mit nukleären Rezeptoren und anderen DNA-bindenden Transkriptionsfaktoren interagiert, um metabolische und endokrine Programme zu koordinieren. RIP140 beeinflusst die Adipogenese, die mitochondriale Funktion, die Lipid- und Glukosehomöostase sowie inflammatorische Signalwege, indem es die chromatinabhängige Aktivierung oder Repression an Zielpromotoren steuert. Durch Crosstalk mit Signalwegen wie der Östrogenrezeptor-Signalgebung, der PPAR-abhängigen Transkription und breiteren Koaktivator-/Korepressor-Netzwerken trägt RIP140 dazu bei, Nährstoffsignale mit zellulärer Differenzierung und Stressantworten zu integrieren. Eine fehlregulierte NRIP1/RIP140-Aktivität wurde in der Literatur mit metabolischen Störungen, reproduktiven Phänotypen und veränderten Transkriptionszuständen in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien unterstützt.

RIP140 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NRIP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

RIP140 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NRIP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NRIP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen RIP140-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NRIP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von RIP140-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des RIP140-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NRIP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.