Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rim3 (h): sc-407285

Présentation

RIMS3 code la molécule 3 interagissant avec Rab3 (Rim3), une protéine d’échafaudage présynaptique qui participe à l’organisation de la machinerie de libération des neurotransmetteurs au niveau des zones actives. Grâce à ses interactions avec les GTPases Rab3 et d’autres composants synaptiques, Rim3 contribue à l’ancrage et à l’amorçage des vésicules, à l’exocytose déclenchée par le calcium et au maintien de l’efficacité synaptique. Les mécanismes associés à RIMS3 recoupent des voies de signalisation neuronale qui régissent la transmission et la plasticité synaptiques, des processus fréquemment impliqués dans des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques. Une expression altérée ou des variations de RIMS3 ont été étudiées dans le contexte de dysfonctionnements du système nerveux, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des déterminants moléculaires de l’organisation des synapses et de l’activité des réseaux neuronaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rim3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RIMS3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RIMS3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RIMS3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rim3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RIMS3 pour l'étude de la signalisation de Rim3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RIMS3 essentiels à la fonction de Rim3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RIMS3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rim3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Rim3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RIMS3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rim3 plasmide HDR (h) et le Rim3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RIMS3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RIMS3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.