Ribosomal Protein L5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403453-ACT

RPL5 codifica a proteína ribossômica L5, um componente central da subunidade ribossômica grande 60S, que se liga ao rRNA 5S e o acompanha durante a biogênese do ribossomo, além de dar suporte a uma tradução precisa. Para além do seu papel estrutural nos ribossomos citosólicos, a RPL5 contribui para a homeostase nucleolar e conecta o estresse ribossômico à regulação da via do p53 por meio de interações com o MDM2, influenciando o controle do ciclo celular e a apoptose. Alterações na RPL5 podem comprometer o processamento de rRNA e a síntese global de proteínas, afetando programas de proliferação e diferenciação. Função ou dosagem alteradas de RPL5 têm sido associadas a ribossomopatias e à desregulação traducional relacionada ao câncer, tornando-a relevante para estudos de proteostase e sinalização de estresse.

Ribosomal Protein L5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RPL5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ribosomal Protein L5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RPL5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RPL5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ribosomal Protein L5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RPL5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ribosomal Protein L5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ribosomal Protein L5 em células tumorais com expressão de RPL5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.