RFC-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422982

Panoramica

Slc19a1 codifica il trasportatore dei folati ridotti RFC-1, uno dei principali trasportatori di membrana plasmatica responsabile dell’assorbimento cellulare dei folati ridotti e di metaboliti correlati del metabolismo a un carbonio. Regolando la disponibilità intracellulare di folati, RFC-1 sostiene la biosintesi dei nucleotidi, le reazioni di metilazione e l’omeostasi redox, collegando questo trasportatore a processi fondamentali quali la replicazione del DNA e la regolazione epigenetica. Un’alterata attività di Slc19a1 può modificare i flussi metabolici dipendenti dai folati e influenzare la capacità proliferativa, la stabilità del genoma e i programmi di differenziamento nelle cellule dei mammiferi. Nei modelli murini, la funzione di RFC-1 viene spesso studiata nel contesto del metabolismo dei folati, della biologia dello sviluppo e dei meccanismi alla base di fenotipi sensibili ai folati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RFC-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Slc19a1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Slc19a1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Slc19a1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RFC-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Slc19a1 per lo studio della segnalazione di RFC-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Slc19a1 critici per la funzione di RFC-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Slc19a1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RFC-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal RFC-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Slc19a1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RFC-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR RFC-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Slc19a1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Slc19a1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.