REEP6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-427671

Panoramica

Reep6 codifica la Receptor Expression-Enhancing Protein 6 (REEP6), un membro della famiglia REEP implicato nel modellamento del reticolo endoplasmatico tubulare e nel coordinamento del traffico proteico all’interno della via secretoria precoce. Nelle cellule di topo, REEP6 è associata alla curvatura di membrana e all’organizzazione di sottodomini del RE che supportano un’elaborazione e un trasporto efficienti delle proteine transmembrana, con effetti a valle sull’omeostasi cellulare e sulle risposte allo stress. REEP6 è di grande rilevanza per studi di biologia neuronale e sensoriale, poiché le proteine della famiglia REEP sono state collegate a processi che mantengono compartimenti di membrana specializzati e la proteostasi. La disregolazione dell’architettura del RE e delle vie di traffico che coinvolgono le proteine REEP è spesso analizzata nel contesto della neurodegenerazione e della disfunzione dei sistemi sensoriali, a supporto di indagini meccanicistiche in modelli pertinenti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO REEP6 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Reep6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Reep6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Reep6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina REEP6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Reep6 per lo studio della segnalazione di REEP6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Reep6 critici per la funzione di REEP6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Reep6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal REEP6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal REEP6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Reep6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal REEP6 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR REEP6 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Reep6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Reep6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.