Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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REEP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407088
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- REEP1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico REEP1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: REEP1 Antibody (A-8): sc-393242
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
REEP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-407088 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
REEP1 (receptor expression-enhancing protein 1) è una proteina di membrana residente nel reticolo endoplasmatico (RE) che contribuisce a modellare l’architettura tubulare del RE e supporta il traffico di membrana, incluse le interazioni con processi neuronali associati ai microtubuli. Partecipa alla dinamica del RE, alla comunicazione RE–mitocondri e al mantenimento di assoni lunghi, in cui l’organizzazione delle membrane e la distribuzione degli organelli sono strettamente collegate all’omeostasi cellulare. La disfunzione di REEP1 è stata associata a fenotipi neurodegenerativi ereditari, in particolare alla paraplegia spastica ereditaria autosomica dominante (SPG31), ed è studiata nel contesto dell’assonopatia e della vulnerabilità dei motoneuroni. I modelli sperimentali valutano comunemente le alterazioni dipendenti da REEP1 nella morfologia del RE, nella distribuzione mitocondriale e nelle vie di segnalazione dello stress, come la risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response).
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO REEP1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene REEP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del REEP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto REEP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina REEP1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di REEP1 per lo studio della segnalazione di REEP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni REEP1 critici per la funzione di REEP1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di REEP1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal REEP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal REEP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus REEP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal REEP1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR REEP1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia REEP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio REEP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.