
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RecQL1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2) | sc-402845-KO-2 | 20 µg | $397.00 | |||
RecQL1 Plasmide HDR (h2) | sc-402845-HDR-2 | 20 µg | $445.00 |
RECQL codifica RecQL1, un’elicasi del DNA 3′–5′ della famiglia RecQ che contribuisce a preservare la stabilità del genoma durante la replicazione e la riparazione del DNA. RecQL1 partecipa alla riattivazione delle forcelle di replicazione, alla risoluzione di strutture secondarie del DNA e alla processazione di intermedi della ricombinazione, collegandola a vie quali la ricombinazione omologa, la riparazione per escissione di basi e la risposta allo stress replicativo. Un’attività di RecQL1 deregolata può influenzare la fedeltà della segregazione cromosomica e l’accumulo di danni al DNA, processi spesso alterati nel cancro e in altre condizioni associate a instabilità genomica. In quanto componente centrale del metabolismo del DNA, RECQL è ampiamente studiato nel contesto delle dinamiche di replicazione, della segnalazione del danno al DNA e del controllo dei checkpoint del ciclo cellulare.
RecQL1 Il plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RECQL in human linee cellulari. Ogni plasmide del pool co-esprime un sgRNA unico, mirato a un sito distinto all'interno del locus RECQL, insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes, e codifica per la GFP per consentire l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo. Questa strategia multi-guida aumenta la probabilità di indurre spostamenti di lettura o delezioni che producono un knockout funzionale, offrendo un'alternativa più robusta agli approcci a guida singola. Le DSB indotte in più siti vengono risolte tramite giunzione non omologa (NHEJ) o, se utilizzate con il modello donatore HDR incluso, tramite riparazione diretta dall'omologia (HDR) in un sito bersaglio definito all'interno del locus.
Se utilizzato in combinazione con il donatore HDR che esprime RFP, la fluorescenza GFP e RFP può essere utilizzata insieme per distinguere le popolazioni cellulari trasfettate da quelle modificate, semplificando i flussi di lavoro di selezione e selezione dei cloni basati sulla citometria a flusso.
Per applicazioni che richiedono cloni knockout confermati e selezionabili, il RecQL1 Plasmide HDR (h2) include un costrutto donatore HDR contenente una cassetta di resistenza alla puromicina (PuroR) e un reporter proteina fluorescente rossa (RFP), affiancati da bracci di omologia specifici per un sito bersaglio definito RECQL.
Se cotrasfettato con il RecQL1 Plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2):
Il costrutto donatore HDR presenta siti loxP che fiancheggiano la cassetta di selezione PuroR-RFP per consentire la rimozione pulita del marcatore dopo la conferma del clone. L'espressione transiente della ricombinasi Cre tramite il vettore Cre incluso : sc-418923 elimina la cassetta, lasciando un sito loxP residuo minimo all'interno del locus RECQL ed eliminando potenziali effetti confondenti sui saggi a valle.
Questo approccio in due fasi:
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.