RBMXL2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-409899-LAC

RBMXL2 (RNA binding motif protein, X-linked-like 2) è una proteina legante l’RNA arricchita nelle cellule germinali, implicata nella regolazione post-trascrizionale dell’espressione genica, inclusi lo splicing alternativo e la maturazione dell’mRNA. In quanto membro della famiglia RBM, RBMXL2 è associata ai processi di assemblaggio dello spliceosoma e delle ribonucleoproteine (RNP) che determinano isoforme trascrittomiche specifiche per tipo cellulare. La deregolazione dello splicing dell’RNA e delle reti di proteine leganti l’RNA è ampiamente rilevante per la stabilità del genoma, i programmi di differenziamento e gli output trascrizionali responsivi allo stress, fornendo un quadro per esaminare come la processazione dell’RNA dipendente da RBMXL2 contribuisca ai fenotipi cellulari. Poiché l’espressione di RBMXL2 è normalmente ristretta e strettamente regolata, può fungere da nodo utile per studiare il controllo dello splicing specifico di tessuto e le sue connessioni con alterazioni del trascrittoma associate a patologie.

Le particelle di attivazione lentivirale RBMXL2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di RBMXL2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale RBMXL2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione RBMXL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di RBMXL2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo RBMXL2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.