Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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RASSF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401931
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RASSF1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico RASSF1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RASSF1 Antibody (3F3): sc-58470
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RASSF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401931 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
RASSF1 (membro 1 della famiglia dei domini di associazione a Ras) è una proteina scaffold che integra segnali correlati a Ras con la segnalazione Hippo e la dinamica del citoscheletro per regolare la progressione del ciclo cellulare, l’apoptosi e la stabilità dei microtubuli. Attraverso interazioni con MST1/2 e altri componenti della via, RASSF1 sostiene programmi pro-apoptotici e di limitazione della crescita che influenzano l’inibizione da contatto e l’integrità genomica. Il gene viene frequentemente silenziato a livello epigenetico tramite ipermetilazione del promotore in un’ampia gamma di tumori, rendendolo un locus oncosoppressore comunemente studiato nella biologia del cancro. Un’alterazione dell’attività di RASSF1 è stata inoltre collegata a un controllo mitotico deregolato e alla segnalazione della risposta allo stress, con effetti a valle sui fenotipi di proliferazione e sopravvivenza cellulare.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RASSF1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RASSF1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RASSF1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RASSF1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RASSF1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RASSF1 per lo studio della segnalazione di RASSF1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni RASSF1 critici per la funzione di RASSF1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RASSF1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal RASSF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RASSF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RASSF1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal RASSF1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RASSF1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RASSF1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RASSF1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.