RASSF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401931

Übersicht

RASSF1 (Ras-assoziiertes Domänenfamilienmitglied 1) ist ein Scaffold-Protein, das Ras-bezogene Signale mit der Hippo-Signalübertragung und der Zytoskelettdynamik verknüpft, um Zellzyklusprogression, Apoptose und die Stabilität von Mikrotubuli zu regulieren. Durch Interaktionen mit MST1/2 und weiteren Komponenten des Signalwegs unterstützt RASSF1 proapoptotische und wachstumshemmende Programme, die Kontaktinhibition und genomische Integrität beeinflussen. Das Gen wird in einem breiten Spektrum von Tumoren häufig epigenetisch durch Promotor-Hypermethylierung stillgelegt und gilt daher als häufig untersuchter Tumorsuppressor-Lokus in der Krebsbiologie. Eine veränderte RASSF1-Aktivität wurde zudem mit einer dysregulierten Mitosekontrolle und Stressantwort-Signalgebung in Verbindung gebracht, mit nachgelagerten Effekten auf Proliferation und Zellüberlebensphänotypen.

Das RASSF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RASSF1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RASSF1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RASSF1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RASSF1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RASSF1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RASSF1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RASSF1-Exone abzielen, die für die RASSF1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RASSF1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RASSF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RASSF1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RASSF1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RASSF1 HDR-Plasmid (h) und RASSF1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RASSF1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RASSF1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.