Particules Lentivirales d'Activation (h) RANK: sc-400559-LAC

Le gène humain **TNFRSF11A** code **RANK** (receptor activator of NF-κB), un membre de la superfamille des récepteurs du TNF qui transmet des signaux dépendants de **RANKL** afin de réguler la différenciation et la survie des ostéoclastes, ainsi que le remodelage osseux. L’engagement de RANK active les voies de signalisation **NF-κB** canonique et non canonique, et recoupe les voies **MAPK** et **PI3K/AKT** pour coordonner des programmes transcriptionnels contrôlant la communication entre cellules immunitaires et l’homéostasie tissulaire. Une activité dérégulée de la voie RANK a été associée à des troubles du renouvellement osseux et à des microenvironnements inflammatoires, et elle est fréquemment étudiée dans des contextes reliant la biologie du squelette à la signalisation immunitaire. En tant que récepteur membranaire aux dynamiques ligand–récepteur bien caractérisées, RANK constitue un point d’entrée maniable pour des études mécanistiques en ostéo-immunologie et sur les réseaux géniques pilotés par NF-κB.

Les particules d'activation lentivirales RANK (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TNFRSF11A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales RANK (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TNFRSF11A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de RANK. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TNFRSF11A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.