Plasmide Double Nickase (h) RAGE: sc-400284-NIC

AGER code le récepteur des produits de glycation avancée (RAGE), un récepteur multiligand de reconnaissance des motifs, appartenant à la superfamille des immunoglobulines, qui se lie aux AGEs, aux protéines S100, à HMGB1 et à d'autres molécules associées aux dommages. La signalisation via RAGE amplifie les réponses inflammatoires et le stress oxydatif par l'intermédiaire de voies comprenant notamment NF-κB, MAPK/ERK, JNK/p38, PI3K/AKT, ainsi qu'un remodelage du cytosquelette dépendant des GTPases Rho. Une stimulation prolongée du récepteur peut favoriser la production de cytokines, l'expression de molécules d'adhérence et une altération de la fonction de barrière, reliant la biologie de RAGE à l'inflammation chronique et au remodelage tissulaire. Une activité AGER/RAGE dérégulée a été impliquée dans les complications vasculaires associées au diabète, l'athérosclérose, la neuroinflammation et l'inflammation associée aux tumeurs, ce qui en fait une cible fréquente dans les études mécanistiques de la signalisation de l'immunité innée.

RAGE Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AGER dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AGER. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AGER. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AGER.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.