RABAPTIN-5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403303

Panoramica

RABEP1 codifica RABAPTIN-5, un effettore di Rab5 che coordina il traffico endocitico precoce promuovendo eventi di ancoraggio e fusione delle vescicole sugli endosomi precoci. Attraverso interazioni con le GTPasi della famiglia Rab5 e con il macchinario di smistamento endosomiale, RABAPTIN-5 contribuisce a regolare l’internalizzazione dei recettori, la scelta tra riciclo o degradazione del carico e la maturazione degli endosomi. Questi processi influenzano l’output di segnalazione dei recettori di superficie e il turnover delle proteine di membrana, collegando la funzione di RABEP1 a vie che controllano la segnalazione dei fattori di crescita, l’assorbimento dei nutrienti e l’omeostasi di membrana. La disregolazione del controllo endocitico e del traffico dipendente da Rab5 è stata associata a dinamiche di segnalazione alterate e a fenotipi cellulari osservati nella biologia del cancro e in modelli rilevanti per la neurodegenerazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RABAPTIN-5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RABEP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RABEP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RABEP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RABAPTIN-5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RABEP1 per lo studio della segnalazione di RABAPTIN-5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RABEP1 critici per la funzione di RABAPTIN-5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RABEP1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RABAPTIN-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RABAPTIN-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RABEP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RABAPTIN-5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RABAPTIN-5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RABEP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RABEP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.