Rab11-FIP1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407521-NIC

RAB11FIP1 は Rab11-FIP1 をコードしており、Rab11 ファミリーのエフェクターとして、Rab11 依存的なリサイクリングエンドソーム輸送および形質膜への膜リサイクリングを協調的に制御します。Rab11-FIP1 は、小型 GTPase やモーター／アダプタータンパク質との相互作用を介して、受容体のリサイクリング、極性輸送、細胞質分裂、ならびに上皮細胞構築の維持の調節に関与します。これらの過程は、受容体や接着分子を含む膜タンパク質の局在とターンオーバーを制御することで、シグナル伝達の出力や細胞運動性に影響を及ぼします。エンドソームリサイクリングの破綻および Rab11-FIP1 に関連する輸送プログラムの異常は、がん生物学における増殖・遊走挙動の変化に結び付けられているほか、神経生物学や代謝調節に関係する小胞輸送経路のより広範な欠陥とも関連することが示されています。

Rab11-FIP1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RAB11FIP1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RAB11FIP1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RAB11FIP1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RAB11FIP1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。