Rab 4A Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401828-LAC

RAB4A codifica Rab4A, una piccola GTPasi che regola la dinamica degli endosomi precoci e il rapido riciclo delle proteine di membrana internalizzate verso la membrana plasmatica. Coordinando gemmazione, motilità e fusione delle vescicole tramite interazioni con proteine effettrici, Rab4A influenza il traffico dei recettori, l’assorbimento di nutrienti e l’attenuazione del segnale in diverse vie, come il riciclo dei recettori per i fattori di crescita e il turnover delle integrine. Un’attività alterata di RAB4A è stata associata a uno smistamento endocitico deregolato, a cambiamenti nella migrazione cellulare e a una rimodulazione degli output di segnalazione nel cancro e in altri contesti proliferativi o neurodegenerativi. Di conseguenza, RAB4A è spesso studiato per chiarire come il trasporto endosomiale controlli la disponibilità dei recettori sulla superficie cellulare, la segnalazione a valle delle chinasi e l’identità dei compartimenti di membrana.

Le particelle di attivazione lentivirale Rab 4A (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di RAB4A in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Rab 4A (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione RAB4A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Rab 4A. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo RAB4A e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.