Rab 4A Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401828-LAC

RAB4A codifica a Rab4A, uma pequena GTPase que regula a dinâmica dos endossomos precoces e a reciclagem rápida de proteínas de membrana internalizadas de volta para a membrana plasmática. Ao coordenar o brotamento de vesículas, a motilidade e a fusão por meio de interações com proteínas efetoras, a Rab4A influencia o tráfego de receptores, a captação de nutrientes e a atenuação de sinais em vias como a reciclagem de receptores de fatores de crescimento e a renovação (turnover) de integrinas. Alterações na atividade de RAB4A têm sido associadas a desregulação da triagem endocítica, mudanças na migração celular e remodelação das respostas de sinalização em câncer e em outros contextos proliferativos ou neurodegenerativos. Como resultado, RAB4A é frequentemente estudado para dissecar como o transporte endossomal controla a disponibilidade de receptores na superfície celular, a sinalização downstream de quinases e a identidade dos compartimentos de membrana.

As Partículas de Ativação Lentivirais Rab 4A (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de RAB4A numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Rab 4A (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição RAB4A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Rab 4A. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo RAB4A e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.