Rab 27b Plasmide Double Nickase (m2): sc-429802-NIC-2

Il gene murino Rab27b codifica la piccola GTPasi Rab27b, membro della superfamiglia Ras che regola il traffico vescicolare controllando l’ancoraggio e l’esocitosi dei granuli secretori e degli organelli correlati agli endosomi tramite interazioni con effettori quali le proteine della famiglia Slp/Slac2 e i motori della miosina. L’attività di Rab27b contribuisce alla secrezione regolata, alla dinamica degli organelli correlati ai lisosomi e al coordinamento del citoscheletro, supportando processi che includono il rilascio dei granuli densi piastrinici, la degranulazione dei neutrofili e la funzione secretoria dell’epitelio. Un traffico dipendente da Rab27b deregolato è stato associato ad alterazioni delle risposte infiammatorie e a un comportamento metastatico in modelli di cancro, rendendo questo bersaglio utile per studiare il rimodellamento del microambiente guidato dalla secrezione. I reagenti Rab27b sono impiegati nella ricerca meccanicistica su cellule primarie murine e in modelli in vivo per indagare la biogenesi dei granuli, la regolazione degli esosomi e del secretoma e i fenotipi di trasporto vescicolare in immunologia e biologia tumorale.

Rab 27b Il plasmide Double Nickase (m2) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Rab27b nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Rab27b. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Rab27b. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Rab27b interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.