Rab 14 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-427035

Panoramica

Rab14 codifica Rab14, una piccola GTPasi che regola il traffico vescicolare tra endosomi, apparato di Golgi e membrana plasmatica, coordinando lo smistamento dei carichi e il riciclo di membrana. Rab14 partecipa ai processi di riciclo endocitico e di trasporto secretorio che determinano la disponibilità dei recettori, la localizzazione dei trasportatori di nutrienti e la dinamica delle membrane. Attraverso i suoi ruoli nella maturazione degli endosomi e nell’organizzazione dei nodi di traffico intracellulare, Rab14 influenza vie collegate alla polarità cellulare, alla citocinesi e alla regolazione metabolica. Un’alterazione del traffico dipendente da Rab14 è stata associata, in sistemi sperimentali, a fenotipi rilevanti per la segnalazione oncogenica, il trasporto responsivo all’insulina e il rimodellamento dei vacuoli contenenti patogeni.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab 14 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rab14 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rab14 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rab14 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rab 14.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rab14 per lo studio della segnalazione di Rab 14, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rab14 critici per la funzione di Rab 14
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rab14 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rab 14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Rab 14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rab14. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rab 14 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Rab 14 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rab14 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rab14 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.