Plasmide CRISPR/Cas9 KO PTH (h): sc-401280

Présentation

L’hormone parathyroïdienne (PTH) est un peptide endocrinien principalement produit par les cellules principales des glandes parathyroïdes. Elle maintient l’homéostasie systémique du calcium et du phosphate en agissant sur le rein et l’os. En se liant à PTH1R, la PTH active les voies de signalisation Gs/AMPc/PKA et Gq/PLC, modulant le couplage ostéoblaste–ostéoclaste ainsi que la gestion tubulaire rénale du calcium et du phosphate, y compris la régulation de l’activation de la vitamine D. La signalisation induite par la PTH s’interface avec des réseaux du métabolisme minéral tels que les voies FGF23–Klotho et influence des programmes transcriptionnels en aval dans des types cellulaires osseux et rénaux. Une expression ou une signalisation de la PTH dérégulée est associée à des troubles de l’équilibre des ions minéraux et du remodelage osseux, offrant un point d’entrée utile pour des études mécanistiques dans des modèles d’endocrinologie, de biologie squelettique et de néphrologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PTH (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PTH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PTH, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PTH à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PTH.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PTH pour l'étude de la signalisation de PTH, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PTH essentiels à la fonction de PTH
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PTH pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PTH plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PTH plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PTH. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PTH plasmide HDR (h) et le PTH (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PTH pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PTH définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.