Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PTEN Plasmide Double Nickase (m): sc-422475-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PTEN Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PTEN Double Nickase Plasmid (m) e il PTEN Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Pten. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PTEN Antibody (A2B1): sc-7974
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PTEN Plasmide Double Nickase (m) | sc-422475-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PTEN Plasmide Double Nickase (m2) | sc-422475-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino *Pten* codifica PTEN, una fosfatasi lipidica e proteica che antagonizza la segnalazione PI3K defosforilando PIP3 a PIP2, limitando così l’attività della via AKT/mTOR. Attraverso questa funzione, PTEN regola la crescita, la sopravvivenza, la proliferazione e la migrazione cellulare, nonché l’omeostasi metabolica, e influenza la stabilità del genoma e le risposte al danno del DNA. L’alterazione della segnalazione dipendente da PTEN è ampiamente utilizzata per modellare una segnalazione dei fattori di crescita deregolata e programmi di differenziamento cellulare modificati nei sistemi dei mammiferi. Nella biologia del topo, *Pten* è spesso studiato in contesti quali lo sviluppo dei tessuti, la regolazione immunitaria e la funzione neuronale, in cui l’ampiezza della segnalazione PI3K–AKT è un determinante chiave del fenotipo.
PTEN Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pten nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pten. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pten. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pten interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.