Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PTEN Double Nickase Plasmid (m): sc-422475-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PTEN Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PTEN Double-Nickase-Plasmid (m) und PTEN Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Pten abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PTEN: sc-7974
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PTEN Double Nickase Plasmid (m) | sc-422475-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PTEN Double Nickase Plasmid (m2) | sc-422475-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen *Pten* kodiert PTEN, eine Lipid- und Proteinphosphatase, die die PI3K-Signalübertragung antagonisiert, indem sie PIP3 zu PIP2 dephosphoryliert und dadurch die Aktivität des AKT/mTOR-Signalwegs begrenzt. Über diese Funktion reguliert PTEN Zellwachstum, Überleben, Proliferation, Migration und die metabolische Homöostase; außerdem beeinflusst es die Genomstabilität und die DNA-Schadensantwort. Störungen der PTEN-abhängigen Signalübertragung werden häufig genutzt, um fehlregulierte Wachstumsfaktor-Signale und veränderte Programme der zellulären Differenzierung in Säugersystemen zu modellieren. In der Mausbiologie wird *Pten* oft in Kontexten wie Gewebeentwicklung, Immunregulation und neuronaler Funktion untersucht, in denen die Stärke der PI3K–AKT-Signale ein wesentlicher Determinant des Phänotyps ist.
PTEN Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Pten-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Pten abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Pten-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Pten-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.