PSS1 Double Nickase Plasmid (h): sc-404364-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PSS1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PSS1 Double-Nickase-Plasmid (h) und PSS1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PTDSS1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PSS1: sc-515376
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PSS1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404364-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PSS1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404364-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTDSS1 kodiert die Phosphatidylserin-Synthase 1 (PSS1), ein Enzym der Membran des endoplasmatischen Retikulums, das Basenaustauschreaktionen katalysiert und dabei aus Phosphatidylcholin Phosphatidylserin erzeugt. Durch die Kontrolle der zellulären Phosphatidylserinmenge trägt PSS1 zur Regulation der Membranbiogenese, des vesikulären Transports, des Lipidaustauschs zwischen Mitochondrien und ER sowie apoptotischer Signale bei, die mit der Externalisierung von Phosphatidylserin verknüpft sind. Die PTDSS1-Aktivität ist in umfassendere Stoffwechselnetzwerke von Phospholipiden und Sphingolipiden eingebunden, die die Organellenidentität und die Signaltransduktion prägen. Eine gestörte Phosphatidylserin-Homöostase wurde mit Beeinträchtigungen neuronaler Funktionen und membranbezogenen Pathologien in Zusammenhang gebracht, was PTDSS1 als Ziel für mechanistische Studien lipidgetriebener zellulärer Phänotypen unterstützt.
PSS1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PTDSS1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PTDSS1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PTDSS1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PTDSS1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.