PSD-95 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420008

Panoramica

Dlg4 codifica la proteina della densità postsinaptica 95 (PSD-95), un’importante proteina scaffold della famiglia MAGUK che organizza le sinapsi eccitatorie raggruppando i recettori del glutammato di tipo NMDA e AMPA insieme a enzimi di segnalazione e regolatori del citoscheletro nella densità postsinaptica. PSD-95 coordina la maturazione e la plasticità sinaptica attraverso vie che regolano il traffico dei recettori, la segnalazione calcio-dipendente e il rimodellamento delle spine dendritiche dipendente dall’attività. Nei modelli neuroscientifici murini, l’alterazione della funzione di Dlg4/PSD-95 è ampiamente utilizzata per indagare i meccanismi alla base dell’equilibrio eccitatorio/inibitorio e della connettività dei circuiti, con rilevanza per fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici. Il suo ruolo centrale nella segnalazione sinaptica lo rende un bersaglio comune per analizzare la trasmissione glutamatergica e la plasticità in vitro e in vivo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PSD-95 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Dlg4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Dlg4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Dlg4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PSD-95.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Dlg4 per lo studio della segnalazione di PSD-95, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Dlg4 critici per la funzione di PSD-95
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Dlg4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PSD-95 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PSD-95 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Dlg4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PSD-95 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PSD-95 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Dlg4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Dlg4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.