PSA/KLK3/Kallikrein 3/Prostate Specific Antigen Plasmide Double Nickase (h): sc-400448-NIC

KLK3 codifica l’antigene prostatico specifico (PSA), una serin-proteasi secreta della famiglia delle callicreine che contribuisce all’elaborazione proteolitica delle proteine del plasma seminale e alla modulazione della rete di proteasi extracellulari. L’attività di PSA/KLK3 si integra con cascate di clivaggio peptidico e con processi di rimodellamento della matrice extracellulare che possono influenzare la differenziazione epiteliale e le interazioni stroma–epitelio nel microambiente prostatico. L’espressione di KLK3 è fortemente regolata dalla segnalazione del recettore degli androgeni, collegandola a programmi trascrizionali ormono-responsivi e alla biologia di linea prostatica. La deregolazione dell’espressione di KLK3 e le alterazioni dell’attività proteasica sono ampiamente studiate nei contesti patologici della prostata, inclusi cambiamenti associati al tumore nella secrezione, nello stato di differenziazione e nel rimodellamento del microambiente.

PSA/KLK3/Kallikrein 3/Prostate Specific Antigen Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KLK3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KLK3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KLK3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KLK3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.