Plásmido CRISPR de Activación (h) PrP: sc-401061-ACT

PRNP codifica la proteína priónica celular (PrP), una glucoproteína de membrana anclada mediante glicosilfosfatidilinositol (GPI), enriquecida en la superficie neuronal y en balsas lipídicas. PrP participa en la proteostasis y en procesos de señalización asociados a la membrana, incluido el tráfico endocítico, la homeostasis redox y la modulación de la función sináptica mediante interacciones con componentes de la matriz extracelular y socios de adhesión celular. El mal plegamiento de PrP en conformaciones resistentes a proteasas subyace a las encefalopatías espongiformes transmisibles y se asocia a neurodegeneración caracterizada por agregación proteica, respuestas alteradas al estrés celular y disfunción neuronal progresiva. Por ello, la regulación de PRNP es relevante para estudiar las vías que gobiernan el control de calidad del plegamiento proteico, la señalización neuroinflamatoria y los mecanismos de supervivencia neuronal.

PrP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRNP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PrP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRNP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRNP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PrP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRNP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PrP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PrP en células tumorales con expresión de PRNP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.