PP5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405979-ACT

PPP5Cは、セリン／スレオニン型プロテインホスファターゼ5（PP5）をコードしている。PP5はTPRドメインをもつホスファターゼで、HSP90シャペロン複合体および複数のクライアントタンパク質との会合を介してシグナル伝達を統合する。PP5は、ストレス応答、細胞周期進行、DNA損傷シグナル伝達におけるリン酸化依存的な制御を調節し、ATM/ATRシグナルやMAPKネットワークに関連する経路の調整も担う。主要な制御因子を脱リン酸化することで、PPP5Cはグルココルチコイド受容体機能、チェックポイント制御、プロテオスタシスに影響を与え、シグナル伝達の忠実性を研究するうえで有用な結節点となる。PPP5Cの活性や発現の異常は、がんや神経生物学の文脈で報告されている増殖やストレス耐性の表現型変化と関連づけられており、機序解明型の疾患モデルにおける重要性が支持されている。

PP5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PPP5Cの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PP5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PPP5C 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPPP5C転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PP5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPPP5C遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPP5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPPP5C発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPP5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。