PP2B-B2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422387

Panoramica

Ppp3r2 codifica la subunità regolatoria B2 della calcineurina (PP2B), una fosfatasi serina/treonina dipendente da Ca2+/calmodulina che modula l’ampiezza del segnale e la specificità per i substrati in risposta ai flussi intracellulari di calcio. PP2B-B2 partecipa a programmi di defosforilazione guidati dal Ca2+ che controllano output trascrizionali come la segnalazione di NFAT, oltre alla plasticità sinaptica, al rimodellamento del citoscheletro e ad altri processi sensibili al calcio. Modellando gli stati di fosforilazione su bersagli diversi, PPP3R2 influenza l’adattamento cellulare alla stimolazione in tessuti eccitabili e non eccitabili. Una segnalazione della calcineurina deregolata è stata implicata in vie immunitarie e infiammatorie e in fenotipi neurologici legati a un’alterata omeostasi del calcio, rendendo PPP3R2 un nodo utile per studi meccanicistici di questi processi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2B-B2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ppp3r2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ppp3r2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ppp3r2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PP2B-B2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ppp3r2 per lo studio della segnalazione di PP2B-B2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ppp3r2 critici per la funzione di PP2B-B2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ppp3r2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PP2B-B2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PP2B-B2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ppp3r2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PP2B-B2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PP2B-B2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ppp3r2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ppp3r2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.