PP2B-Aα Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422383
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PP2B-Aα El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PP2B-Aα, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PP2B-Aα Anticuerpo (D-9): sc-17808
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PP2B-Aα Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422383 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Ppp3ca codifica la subunidad catalítica Aα de la fosfatasa proteica 2B (PP2B-Aα/calcineurina), una fosfatasa de serina/treonina dependiente de Ca²⁺/calmodulina que conecta las señales intracelulares de calcio con programas transcripcionales y del citoesqueleto. En células de ratón, la calcineurina desfosforila sustratos clave como los factores de transcripción NFAT, modulando la expresión génica dependiente de calcio, la señalización inmunitaria y procesos neuronales dependientes de la actividad, incluida la plasticidad sináptica. PP2B-Aα participa en vías que controlan la regulación de canales iónicos, la adaptación mitocondrial y metabólica, y redes de señalización sensibles al estrés. La actividad desregulada de la calcineurina se ha vinculado, en modelos experimentales, con cambios en la activación de células inmunitarias, fenotipos del neurodesarrollo y neurodegenerativos, y un remodelado maladaptativo del músculo cardíaco y esquelético.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PP2B-Aα (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ppp3ca en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ppp3ca junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ppp3ca tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PP2B-Aα.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ppp3ca para la investigación de la señalización de PP2B-Aα, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ppp3ca críticos para la función de PP2B-Aα
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ppp3ca para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PP2B-Aα CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PP2B-Aα CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ppp3ca. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PP2B-Aα (m) y el plásmido HDR PP2B-Aα (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ppp3ca para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ppp3ca definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.