Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PON2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403181-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PON2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PON2 Double Nickase Plasmid (h) e il PON2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PON2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PON2 Antibody (C-5): sc-374158
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PON2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403181-NIC | 20 µg | $410.00 |
La paraoxonasi 2 (PON2) è una lattonasi associata alla membrana, espressa in modo ubiquitario, che limita lo stress ossidativo riducendo la perossidazione lipidica e modulando l’omeostasi redox cellulare. Si localizza principalmente nel reticolo endoplasmatico e nei mitocondri, dove influenza la gestione delle specie reattive dell’ossigeno, la segnalazione infiammatoria e le vie di sopravvivenza legate alla funzione mitocondriale. L’attività di PON2 è stata collegata alla regolazione del metabolismo lipidico e delle risposte cellulari allo stress, che plasmano la suscettibilità a disfunzioni metaboliche e vascolari. Alterazioni dell’espressione o della funzione di PON2 sono state riportate in contesti di aterosclerosi, neurodegenerazione e biologia tumorale, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici sul danno ossidativo e sull’infiammazione.
PON2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PON2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PON2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PON2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PON2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.