PML Plasmide Double Nickase (h): sc-400145-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PML Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PML Double Nickase Plasmid (h) e il PML Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PML. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PML Antibody (E-11): sc-377390
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PML Plasmide Double Nickase (h) | sc-400145-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PML Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400145-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La proteina della leucemia promielocitica (PML) è una proteina scaffold della famiglia TRIM che nuclea i corpi nucleari di PML, organizzando proteine coinvolte nella regolazione trascrizionale, nelle risposte al danno al DNA, nella senescenza, nell’apoptosi e nella difesa antivirale intrinseca. PML è regolata da modificazioni post-traduzionali, inclusa la SUMOilazione, che governa l’assemblaggio dei corpi nucleari e il reclutamento di partner quali p53 e fattori legati ad ATR/CHK durante lo stress genotossico. Attraverso questi hub, PML influenza lo stato della cromatina, i programmi genici stimolati dall’interferone e le vie di stabilità del genoma che orientano le decisioni sul destino cellulare. La disregolazione di PML è stata associata ad alterazioni della segnalazione di stress e a contesti di trasformazione maligna, inclusi meccanismi rilevanti per la leucemia che coinvolgono la disgregazione dei corpi nucleari.
PML Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PML nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PML. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PML. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PML interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.