plexin-D1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405134-ACT

Il gene umano **PLXND1** codifica la **plexina-D1**, un recettore transmembrana a singolo passaggio che media segnali di guida dipendenti dalle semaforine, regolando la migrazione cellulare, il rimodellamento del citoscheletro e il patterning direzionale. La segnalazione di plexina-D1 si integra con le GTPasi della famiglia Rho e con le dinamiche dell’actina associate, influenzando il comportamento endoteliale, la gemmazione angiogenica e la morfogenesi tissutale. L’attività di PLXND1 è inoltre collegata a cambiamenti dipendenti dal contesto nella motilità invasiva e nei programmi di rimodellamento vascolare, frequentemente studiati in biologia del cancro e in microambienti infiammatori. Di conseguenza, la plexina-D1 viene comunemente analizzata come nodo di connessione tra le vie di guida, la comunicazione cellula–cellula e le interazioni con la matrice extracellulare.

plexin-D1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PLXND1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

plexin-D1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PLXND1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PLXND1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di plexin-D1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PLXND1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da plexin-D1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via plexin-D1 nelle cellule tumorali con espressione di PLXND1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.