Plásmido CRISPR de Activación (h) plexin-D1: sc-405134-ACT

El PLXND1 humano codifica plexina-D1, un receptor transmembrana de paso único que media señales de guía dependientes de semaforinas para regular la migración celular, la remodelación del citoesqueleto y la organización direccional de patrones. La señalización de la plexina-D1 se integra con las GTPasas de la familia Rho y con la dinámica asociada de la actina para influir en el comportamiento endotelial, la gemación angiogénica y la morfogénesis tisular. La actividad de PLXND1 también se asocia a cambios dependientes del contexto en la motilidad invasiva y en programas de remodelación vascular, que se estudian con frecuencia en biología del cáncer y en microambientes inflamatorios. Como resultado, la plexina-D1 se examina de manera habitual como un nodo que conecta vías de guía con la comunicación célula–célula y las interacciones con la matriz extracelular.

plexin-D1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PLXND1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

plexin-D1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PLXND1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PLXND1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de plexin-D1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PLXND1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de plexin-D1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía plexin-D1 en células tumorales con expresión de PLXND1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.