plexin-A3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422320

Panoramica

Plxna3 codifica la plexina-A3, un recettore transmembrana per le semaforine di classe 3 che regola la guida assonale, la migrazione neuronale e l’organizzazione dendritica attraverso la segnalazione semaforina–neuropilina–plexina. La plexina-A3 integra segnali che rimodellano il citoscheletro di actina e microtubuli tramite le GTPasi della famiglia Rho e i relativi effettori, influenzando il collasso del cono di crescita e la motilità direzionale. Al di fuori del sistema nervoso, la plexina-A3 è stata collegata anche al controllo dell’adesione e del movimento cellulare, processi rilevanti per la patterning dello sviluppo e l’organizzazione dei tessuti. La deregolazione delle vie semaforina/plexina è stata associata ad anomalie del neurosviluppo e a fenotipi migratori alterati in modelli rilevanti per la patologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO plexin-A3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Plxna3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Plxna3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Plxna3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina plexin-A3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Plxna3 per lo studio della segnalazione di plexin-A3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Plxna3 critici per la funzione di plexin-A3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Plxna3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal plexin-A3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal plexin-A3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Plxna3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal plexin-A3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR plexin-A3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Plxna3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Plxna3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.