Plásmido CRISPR de Activación (h) plexin-A2: sc-403886-ACT

PLXNA2 codifica el receptor humano plexina-A2, una molécula de guía transmembrana que transduce señales de semaforinas para regular la remodelación del citoesqueleto, la adhesión celular y la migración direccional. La plexina-A2 actúa en redes de señalización semaforina–plexina que se conectan con las GTPasas de la familia Rho y con vías aguas abajo que controlan el crecimiento de neuritas, la guía axonal y la organización sináptica. Además de sus funciones en el desarrollo y la plasticidad neuronales, la señalización asociada a PLXNA2 se ha investigado en contextos que implican alteraciones de la motilidad celular y del patrón tisular. La desregulación de componentes de la vía semaforina/plexina se estudia con frecuencia por sus vínculos con fenotipos del neurodesarrollo y con la reconfiguración de la vía en modelos celulares relevantes para enfermedades.

plexin-A2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PLXNA2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

plexin-A2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PLXNA2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PLXNA2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de plexin-A2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PLXNA2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de plexin-A2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía plexin-A2 en células tumorales con expresión de PLXNA2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.