Plasmide CRISPR/Cas9 KO pki γ (h): sc-411573

Présentation

PKIG code pour la protéine inhibitrice de la protéine kinase gamma (PKIγ), un inhibiteur endogène de la protéine kinase A (PKA) dépendante de l’AMPc, qui contribue à limiter la signalisation basale de la PKA ainsi que celle induite par des stimuli. En se liant à la sous-unité catalytique de la PKA, PKIγ module le contrôle, dépendant de la phosphorylation, de la transcription, du métabolisme, de la progression du cycle cellulaire et de la dynamique du cytosquelette en aval des voies RCPG–adénylate cyclase–AMPc. L’activité de PKIG recoupe l’expression génique régulée par CREB et, plus largement, des réseaux de signalisation impliquant des kinases qui façonnent les réponses cellulaires au stress et les programmes de différenciation. Une dérégulation de la signalisation AMPc/PKA a été impliquée dans de nombreux processus liés aux maladies, notamment la croissance des cellules tumorales, des anomalies de la signalisation endocrine et la fonction neuronale, ce qui fait de PKIG un nœud pertinent pour les études mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO pki γ (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PKIG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PKIG, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PKIG à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine pki γ.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PKIG pour l'étude de la signalisation de pki γ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PKIG essentiels à la fonction de pki γ
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PKIG pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le pki γ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le pki γ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PKIG. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le pki γ plasmide HDR (h) et le pki γ (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PKIG pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PKIG définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.