Plásmido CRISPR de Activación (h) PKC beta: sc-400263-ACT

PRKCB codifica la proteína quinasa C beta (PKCβ), una quinasa de serina/treonina sensible al diacilglicerol y al Ca2+ que transduce señales desde receptores acoplados a la fosfolipasa C. En células humanas, PKCβ regula redes de fosforilación que controlan la señalización de NF-κB y MAPK, la remodelación del citoesqueleto, el tráfico vesicular y las decisiones del ciclo celular y de supervivencia. La actividad de PRKCB está estrechamente vinculada a la señalización del receptor de células B y de receptores Fc, y modula la producción de mediadores inflamatorios y las respuestas al estrés oxidativo. La desregulación de la señalización de PKCβ se ha implicado en una activación inmunitaria aberrante y en programas de señalización oncogénicos, lo que convierte a PRKCB en un nodo útil para estudiar el reajuste dependiente del contexto de las vías de quinasas.

PKC beta El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRKCB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PKC beta El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRKCB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRKCB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PKC beta. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRKCB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PKC beta en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PKC beta en células tumorales con expresión de PRKCB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.