PiT1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-422988-LAC

Il gene murino Slc20a1 codifica PiT1 (SLC20A1), un simportatore sodio-dipendente del fosfato inorganico (Pi) che sostiene l’assorbimento cellulare di fosfato necessario per la biosintesi dei nucleotidi, il turnover dei fosfolipidi di membrana e l’omeostasi bioenergetica. PiT1 contribuisce al sensing del fosfato e alla segnalazione responsiva ai nutrienti, intersecando programmi di controllo metabolico e del ciclo cellulare che influenzano proliferazione e sopravvivenza. Durante lo sviluppo e nel mantenimento dei tessuti adulti, l’attività di PiT1 è associata agli stati di differenziamento e alla disponibilità di fosfato extracellulare, processi rilevanti per studi sulla gestione degli ioni minerali, sul rimodellamento tissutale e sullo stress metabolico. Alterazioni del trasporto del fosfato e delle vie associate a PiT1 sono state investigate in contesti quali la biologia della calcificazione scheletrica e vascolare, il metabolismo delle cellule tumorali e i microambienti infiammatori, supportando ricerche meccanicistiche su fenotipi dipendenti dal fosfato.

Le particelle di attivazione lentivirale PiT1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Slc20a1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PiT1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Slc20a1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PiT1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Slc20a1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.