Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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PiT1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403121-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PiT1 Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- PiT1 CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal PiT1 CRISPR Activation Plasmid (h) e dal PiT1 CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di SLC20A1. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PiT1 Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-403121-ACT | 20 µg | $397.00 |
SLC20A1 codifica PiT1 (SLC20A1), un trasportatore di fosfato inorganico (Pi) dipendente dal sodio localizzato sulla membrana plasmatica, che sostiene l’assorbimento di fosfato necessario per la sintesi dei nucleotidi, il metabolismo dei fosfolipidi e la bioenergetica ATP-dipendente. Oltre alla funzione di trasporto, PiT1 contribuisce al controllo della crescita cellulare e al sensing dei nutrienti, collegando la disponibilità extracellulare di fosfato ai programmi metabolici intracellulari e alla progressione del ciclo cellulare. L’alterata espressione di SLC20A1 è stata studiata in contesti di omeostasi del fosfato deregolata, proliferazione aberrante e risposte allo stress, in cui il flusso di Pi può influenzare reti di segnalazione e processi correlati alla calcificazione. In quanto trasportatore umano ampiamente espresso, PiT1 rappresenta un nodo utile per studiare la regolazione del metabolismo e dell’espressione genica dipendente dal fosfato in diversi tipi cellulari.
PiT1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLC20A1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
PiT1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLC20A1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLC20A1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PiT1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLC20A1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PiT1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PiT1 nelle cellule tumorali con espressione di SLC20A1 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.