Pim-1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-400376-LAC-2

Il gene umano PIM1 codifica Pim-1, una chinasi serina/treonina costitutivamente attiva che integra i segnali di citochine e fattori di crescita per regolare la sopravvivenza cellulare, la progressione del ciclo cellulare e le risposte trascrizionali. Pim-1 agisce a valle di vie quali JAK/STAT e coopera con la segnalazione PI3K–AKT e NF-κB, influenzando la fosforilazione di substrati coinvolti nel controllo dell’apoptosi (ad es., BAD) e nei programmi proliferativi. Un’espressione o un’attività disregolata di PIM1 è stata associata a una crescita aberrante di cellule ematopoietiche e linfoidi ed è spesso studiata nel contesto delle reti di segnalazione oncogeniche e dei meccanismi di resistenza ai trattamenti. L’editing del gene PIM1 supporta studi meccanicistici sulla segnalazione guidata da chinasi, la mappatura delle vie tramite fosfoproteomica e screening di genomica funzionale in modelli di biologia del cancro e di immunologia.

Le particelle di attivazione lentivirale Pim-1 (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PIM1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Pim-1 (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PIM1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Pim-1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PIM1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.