Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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PIKE Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405344
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PIKE Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PIKE, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PIKE Antibody (G-9): sc-166864
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PIKE Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-405344 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
AGAP2 codifica PIKE, una GTPasi multidominio e adattatore di segnalazione che collega gli input dei recettori per i fattori di crescita alla segnalazione della fosfoinositide 3-chinasi (PI3K), influenzando così le vie dipendenti da PIP3 che regolano proliferazione, sopravvivenza e dinamiche del citoscheletro. PIKE interagisce con componenti delle cascate dei recettori tirosin-chinasici e modula effettori a valle come AKT, con effetti su endocitosi, traffico vescicolare e rimodellamento dell’actina in molteplici tipi cellulari. Un’attività deregolata di AGAP2/PIKE è stata collegata ad alterazioni della segnalazione oncogenica, delle risposte allo stress metabolico e a fenotipi invasivi, tramite perturbazioni dell’architettura delle reti centrate su PI3K. Queste proprietà rendono AGAP2 un nodo utile per analizzare l’integrazione dei segnali e il controllo a feedback all’interno delle vie di crescita e sopravvivenza in modelli cellulari umani.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PIKE (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AGAP2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AGAP2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AGAP2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PIKE.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AGAP2 per lo studio della segnalazione di PIKE, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni AGAP2 critici per la funzione di PIKE
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AGAP2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PIKE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PIKE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AGAP2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PIKE Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PIKE (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AGAP2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AGAP2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.