Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PIASx Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421655
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PIASx El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PIASx, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PIASx Anticuerpo (D-12): sc-166494
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PIASx Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421655 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Pias2 codifica PIASx, un miembro de la familia de inhibidores proteicos de STAT activado (PIAS) que funciona como ligasa E3 de SUMO y correagulador transcripcional. PIASx modula la transcripción dependiente de señales al influir en las vías de STAT, SMAD y de receptores nucleares, y puede alterar complejos asociados a la cromatina mediante la SUMOilación de proteínas diana. A través de estas actividades, PIASx contribuye a la regulación de la señalización inmunitaria innata, las respuestas a citocinas y los programas de ciclo celular y diferenciación. La desregulación de la SUMOilación mediada por PIASx y del control transcripcional se ha vinculado con una señalización inflamatoria aberrante y redes transcripcionales oncogénicas en modelos mecanísticos de enfermedad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PIASx (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pias2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pias2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pias2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PIASx.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pias2 para la investigación de la señalización de PIASx, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Pias2 críticos para la función de PIASx
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pias2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PIASx CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PIASx CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pias2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PIASx (m) y el plásmido HDR PIASx (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pias2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pias2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.