PIASx Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403954

Panoramica

PIAS2 codifica PIASx, una ligasi E3 per SUMO e coregolatore trascrizionale che modula la stabilità delle proteine, la localizzazione subcellulare e l’output trascrizionale attraverso la SUMOilazione. PIASx integra segnali provenienti dalle vie delle citochine e dei fattori di crescita regolando fattori quali i membri della famiglia STAT, i recettori nucleari degli ormoni e componenti della risposta al danno del DNA, influenzando così la progressione del ciclo cellulare, l’apoptosi e programmi trascrizionali legati all’immunità. Grazie ai suoi ruoli nella modificazione post-traduzionale e nell’equilibrio tra repressione e attivazione trascrizionale, PIASx è stato associato a reti di segnalazione deregolate osservate nella biologia del cancro, nell’infiammazione e in fenotipi di risposta allo stress. Un’attività alterata di PIAS2 può incidere sul mantenimento del genoma e sul crosstalk tra vie di segnalazione, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sulla regolazione della trascrizione e sulla fedeltà della segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PIASx (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PIAS2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PIAS2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PIAS2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PIASx.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PIAS2 per lo studio della segnalazione di PIASx, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PIAS2 critici per la funzione di PIASx
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PIAS2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PIASx CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PIASx CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PIAS2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PIASx Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PIASx (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PIAS2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PIAS2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.