PIASx Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403954

Descripción general

PIAS2 codifica PIASx, una ligasa E3 de SUMO y correagulador transcripcional que modula la estabilidad proteica, la localización subcelular y la salida transcripcional mediante la sumoilación. PIASx integra señales de las vías de citocinas y factores de crecimiento al regular factores como miembros de la familia STAT, receptores de hormonas nucleares y componentes de la respuesta al daño del ADN, influyendo así en la progresión del ciclo celular, la apoptosis y programas de transcripción relacionados con la inmunidad. A través de sus funciones en la modificación postraduccional y en el equilibrio entre represión/activación transcripcional, PIASx se ha vinculado con redes de señalización desreguladas observadas en biología del cáncer, inflamación y fenotipos de respuesta al estrés. La actividad alterada de PIAS2 puede afectar el mantenimiento del genoma y el crosstalk entre vías, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de la regulación transcripcional y la fidelidad de la señalización.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PIASx (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PIAS2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PIAS2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PIAS2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PIASx.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PIAS2 para la investigación de la señalización de PIASx, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PIAS2 críticos para la función de PIASx
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PIAS2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PIASx CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PIASx CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PIAS2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PIASx (h) y el plásmido HDR PIASx (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PIAS2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PIAS2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.