PI 3-kinase p85β Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401991

Panoramica

PIK3R2 codifica la subunità regolatoria p85β della fosfoinositide 3-chinasi (PI3K) di classe IA, che stabilizza e modula le subunità catalitiche p110 e collega le tirosin-chinasi recettoriali attivate e le proteine adattatrici alla segnalazione PI3K. Attraverso il controllo della produzione di PIP3, la PI3-chinasi p85β governa AKT–mTOR e vie correlate che regolano crescita cellulare, metabolismo, sopravvivenza e dinamica del citoscheletro. L’alterazione della regolazione della via PI3K è ampiamente implicata nella segnalazione oncogenica, nelle risposte a insulina/IGF e nella funzione delle cellule immunitarie. Poiché p85β influenza sia l’attività basale sia quella dipendente dallo stimolo di PI3K, è spesso studiata nel contesto del feedback di segnalazione, del crosstalk tra vie e del rimodellamento delle reti di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PI 3-kinase p85β (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PIK3R2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PIK3R2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PIK3R2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PI 3-kinase p85β.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PIK3R2 per lo studio della segnalazione di PI 3-kinase p85β, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PIK3R2 critici per la funzione di PI 3-kinase p85β
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PIK3R2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PI 3-kinase p85β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PI 3-kinase p85β CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PIK3R2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PI 3-kinase p85β Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PI 3-kinase p85β (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PIK3R2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PIK3R2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.