PGD synthase Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-405437-LAC

L’HPGDS umano codifica la prostaglandina D sintasi ematopoietica (PGD sintasi), un enzima dipendente dal glutatione che converte la prostaglandina H2 in prostaglandina D2 all’interno della rete biosintetica dell’acido arachidonico e degli eicosanoidi. La PGD2 e i suoi metaboliti a valle regolano la chemiotassi dei leucociti, la segnalazione delle citochine, il tono vascolare e il “class switching” dei mediatori lipidici, collegando l’attività di HPGDS ai processi immunitari e infiammatori. L’espressione di HPGDS è marcata nei mastociti e in altre linee ematopoietiche ed è comunemente studiata nel contesto dell’infiammazione allergica, dell’asma e di meccanismi più ampi di malattia infiammatoria. Poiché la segnalazione della PGD2 coinvolge le vie recettoriali DP1/DP2 e interseca lo stress ossidativo e l’equilibrio tra leucotrieni e prostaglandine, HPGDS rappresenta un nodo utile per analizzare i programmi trascrizionali guidati dai mediatori lipidici.

Le particelle di attivazione lentivirale PGD synthase (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di HPGDS in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PGD synthase (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione HPGDS, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PGD synthase. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo HPGDS e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.