Plasmide Double Nickase (h) Peroxin 14: sc-405075-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Peroxin 14 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Peroxin 14 Double Nickase (h) et le plasmide Peroxin 14 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PEX14. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Peroxin 14 Antibody (1G12): sc-293383
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Peroxin 14 | sc-405075-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Peroxin 14 | sc-405075-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PEX14 code la péroxine 14, un composant intégral de la membrane peroxysomale qui sert de facteur d’ancrage pour les complexes récepteurs PEX5 et PEX7 lors de l’import des enzymes de la matrice portant les signaux d’adressage PTS1 et PTS2. Par ce rôle, PEX14 est essentielle à la biogenèse des peroxysomes, au maintien de la protéostasie de l’organite et à des voies métaboliques incluant la β‑oxydation des acides gras à très longue chaîne et l’homéostasie redox cellulaire. Une perturbation de l’import dépendant de PEX14 désorganise le métabolisme peroxysomal et peut, secondairement, affecter la fonction mitochondriale, la signalisation lipidique et la gestion des espèces réactives de l’oxygène. La dérégulation de l’assemblage des peroxysomes et de la machinerie d’import est impliquée dans les troubles de la biogenèse peroxysomale et dans des mécanismes plus larges pertinents pour le neurodéveloppement et les dysfonctions métaboliques.
Peroxin 14 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PEX14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PEX14. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PEX14. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PEX14.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.